一、WB實驗中的蛋白酶抑制劑作用
WB實驗中的蛋白酶抑制劑主要是在蛋白質(zhì)提取過程中,防止蛋白質(zhì)水解,從而保持蛋白質(zhì)的完整性。在蛋白質(zhì)純化、提取過程中常受到其本身存在的水解酶的影響。在提取蛋白質(zhì)的過程中細胞破碎釋放出蛋白酶,這些酶在與欲提取的蛋白質(zhì)接觸時,一旦條件適宜,就會發(fā)生反應,導致蛋白質(zhì)分解。
二、WB實驗中的蛋白酶抑制劑的作用原理
蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)從廣義上指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團結合,使蛋白酶活力下降,甚至消失,但不使酶蛋白變性的物質(zhì)。
三、WB實驗中的蛋白酶抑制劑的使用條件
1. 因為各種蛋白酶對不同蛋白質(zhì)的敏感性相同,因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度。
2. 由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低,應注意在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑時應充分混勻,以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。
四、常用的蛋白酶抑制劑的分類
1.苯甲基huang酰氟化物( PMSF)
2. 乙二胺四乙酸鈉( EDTA-Na2 )
3.胃蛋白酶抑制劑
4.亮抑蛋白酶肽
5.胰蛋白酶抑制劑
6.抑胃肽
7.胱蛋白酶抑制劑
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